高壓蒸汽滅菌，用高溫加高壓滅菌，不僅可殺死一般的細菌、真菌等微生物，對芽胞、孢子也有殺滅效果，是最可靠、應用最普遍的物理滅菌法。主要用于能耐高溫的物品，如培養基、金屬器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡膠及一些藥物的滅菌。高壓蒸氣滅菌器的類型和樣式較多，如：下排氣式壓力蒸氣滅菌器是普遍應用的滅菌設備，壓力升至103.4kPa（1.05kg/cm2），溫度達121.3°C，維持15~30分鐘，可達到滅菌目的。脈動真空壓力蒸氣滅菌器已成為最先進的滅菌設備。滅菌條件要求：蒸氣壓力205.8kPa（2.1kg/cm2），溫度達132℃以上并維持10分鐘，即可殺死包括具有頑強抵抗力的芽孢、孢子在內的一切微生物。