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發布時間:2025-10-27閱讀(0)
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sds-page凝膠電泳原理:聚丙烯酰胺凝膠電泳是網狀結構,具有分子篩效應,它有兩種形式,一種是非變性聚丙烯酰胺凝膠,蛋白質在電泳中保持完整的狀態,蛋白在其中依三種因素分開:蛋白大小,形狀和電荷,在電場的作用下,帶電粒子能在聚丙烯凝膠中遷移,其遷移速度與帶電粒子的大小、構型和所帶的電荷有關,十二烷基磺酸鈉(SDS)能與蛋白質的結合,改變蛋白質原有的構象,使其變成近似于雪茄煙形的長橢圓棒,其短軸長度一樣,而長軸與分子量大小成正比。
sds-page凝膠電泳的應用:蛋白質純度分析;蛋白質分析量的測定,根據遷移率大小測定蛋白質亞基的分子量;蛋白質濃度的測定;蛋白質水解的分析;免疫沉淀蛋白的鑒定;免疫印跡的第一步;蛋白質修飾的鑒定;分離和濃縮用于產生抗體的抗原;分離放射性標記的蛋白質;顯示小分子多肽。 SDS-PAGE有效分離范圍取決于聚丙烯酰胺的濃度和交聯度,其孔徑隨著雙丙烯酰胺與丙烯酰胺比率的增加而減小,比率接近于1:20時,孔徑達到最小值,分子量低于10kD的小分子肽類,即使用較高濃度的聚丙烯酰胺凝膠的SDS-PAGE也不能完全分離,或是顯不出色,或是顯帶較弱,帶型彌散。且分子量越小,效果也越差。 |
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